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實(shí)驗時(shí)刻
軟瓊脂克隆實(shí)驗
軟瓊脂克隆形成又名非錨定依賴(lài)性生長(cháng)實(shí)驗(Anehorage-independentassay），利用軟瓊脂為培養介質(zhì)，使細胞在懸浮狀態(tài)下生長(cháng)。
軟瓊脂克隆形成實(shí)驗方法簡(jiǎn)單，適用于貼壁生長(cháng)的細胞。
細胞克隆形成率表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量，主要反映細胞群體依賴(lài)性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。
Part 01.
實(shí)驗材料
Part 02.
實(shí)驗操作流程
常見(jiàn)問(wèn)題與解答
A：細胞接種密度與最終實(shí)驗結果密切相關(guān)，若細胞太多，形成克隆數目太多，處理結果時(shí)數克隆不僅容易出錯，而且圖片很難看（下圖左）。細胞太少，不能形成克隆。如下圖所示：
上圖我們看到3株癌細胞在6孔板克隆形成圖片，第一個(gè)明顯鋪板細胞太密集，導致難以統計數據；中間那個(gè)正好，最后面那個(gè)細胞數量偏少，且細胞鋪板不均勻。因此，為了獲得美觀(guān)的圖片和準確的數據，第一次實(shí)驗最好設置細胞接種梯度，如500-1000-2000-5000個(gè)/孔挑選出最合適的接種密度。細胞在進(jìn)行克隆形成實(shí)驗時(shí)要求有95%以上的分散度，否則結果的準確度會(huì )受到很大影響；另外注意細胞計數時(shí)建議多計數幾次。
A：并非每種細胞都可以形成克隆，克隆形成率與細胞本身增殖能力有關(guān)。還與接種細胞密度，加入培養液的體積、血清濃度有關(guān)。因該實(shí)驗處理時(shí)間較長(cháng)，應給細胞多加培養基，如每孔4ml，或者3天更換一次培養基，以供給細胞充足的營(yíng)養。
END
